Векторы для получения гибридных белков

Рис.11.a) Векторы, сконструированные для получения белков, слитых с флюоресцирующими белками. MCS - различные полилинкеры; ori - репликативный регион; f1 ori, место начала генерации одноцепочечной ДНК; Cm, Amp, Spc - гены устойчивости к хлорамфениколу, ампициллину и спектиномицину, соответственно. FP - ген флуоресцентного белка (тип флуоресцентного белка указан в таблице под соответствующим вектором; для pSG1164: FP=gfp mut1; pSG1170: FP=gfp uv). lacZ - ген b-галактозидазы; lacI - ген репрессора lacI; amyE - сайты интеграции в хромосому; Pxyl и Pspac - ксилоз-зависимый и IPTG-зависимый промоторы, соответственно; Ppen - промотор пенициллиназы; b) вектор pSG1170, предназначенный для проведения слияния белка клеточного деления DivIVA с GFPuv, после интеграции в хромосому.

Для проверки эффективности работы векторов, вектор pSG1170 был использован для выявления локализации белка DivIVA, участвующего в выборе сайта деления (рис.11b). Как и предполагалось, белок локализовался на обоих полюсах и в центре делящихся клеток.

Было получено ряд производных данных векторов

основанных на голубом (CFP, cyan fluorescent protein) и жёлтом (YFP, yellow fluorescent protein) спектральных вариантах GFP, а также красном флуоресцирующем белке (DsRed), не являющимся производным GFP (Feucht A., Lewis., 2001). В первую очередь они были созданы для проведения более эффективного множественного мечения клеток.

Векторы pSG1186 (cfp), pSG1187 (yfp) и pSG1194 (dsRed) (рис.11a) являются производными pSG1151 со следующими изменениями: (i) гены флуоресцентного белка с повышенным содержание GC пар; (ii) изменён полилинкер, расположенный проксимальнее гена флуоресцентного белка; (iii) дополнительный кодон GTG сразу после старт-кодона гена флуоресцентного белка.

Векторы pSG1190 (cfp) и pSG1191 (yfp) являются производными pSG1729 со следующими изменениями: (i) гены флуоресцентного белка с повышенным содержание GC пар (ii) дополнительный кодон GTG сразу после старт-кодона гена флуоресцентного белка. Полилинкеры без изменений.