Репликация у эукариот.

структуре и функциям она схожа с доменом ДНК-полимеразы I E.coli имеющего 5¢-3¢ экзонуклеазную активность.[3].

Следующим этапом стало создание систем для репликации хромосом вирусов животных in vitro. В ре­зуль­тате в настоящее время хромосома вируса SV40 может быть реплицирована in vitro с использованием всего лишь восьми компонентов клеток млекопитающих. По своим свойствам эти белки напоминают белки необхо­димые для репликации в E.coli. Репликация ДНК эукариот также идёт в двух направлениях; для син­теза ДНК нужны праймеры синтезируемые праймазой; синтез лидирующей цепи непрерывен, а отстающей прерывистый. Как показано на рис.7, инициация репликации ДНК вируса SV40 происходит в уникальном сайте, точке начала репликации, путём связывания кодируемого вирусом белка, называемого T antigen, или Tag.

Этот полифункциональный белок расплетает дуплекс ДНК благодаря своей геликазной активности. Распле­тание дуплекса требует также наличия АТФ и белка репликации A (RPA), кодируемого клеткой-хозяи­ном и обладающего способностью связываться с однонитчатой ДНК (как SSB-белки в E.coli). Одна молекула ДНК-полимеразы α (Pol α) прочно связывается с праймазой и затем связывается с образовавшейся однонит­чатой ДНК. Праймаза образует РНК-праймеры, которые затем удлиняются на небольшую длину Pol α , обра­зуя пер­вую часть ведущих цепей, которые растут от точки ori в противоположных направлениях. Активность Pol α стимулируется фактором репликации C (RFC).

Затем c 3-концамb удлинённых Pol α РНК-праймеров связывается PCNA (proliferating cell nuclear antigen) и замещает Pol α на обоих растущих ведущих цепях, прерывая их синтез. На следующем этапе Pol δ связывается с PCNA на 3¢-концах растущих цепей. PCNA повышает процессивность Pol δ так, что полимераза может непрерывно продолжать синтез ведущих цепей. Таким образом, функция PCNA аналогична функции β-субъединицы полимеразы III E.coli, т.к. оба белка образуют сходные структуры (“кольца”), охватывающие ДНК и способствующие удержанию полимераз на цепи ДНК. Они, однако, имеют различные первичные структуры; кроме того PCNA-тример, а не димер как β-субъединица полимеразы III E.coli.

Комплекс праймаза- Pol α. садится на цепь, являющуюся матрицей для отстающей цепи и вместе с RFC осуще­ствляют синтез запаздывающей цепи.

Наконец, как и в E.coli топоизомеразы сни­мают меха­ническое напряжение, возникающее при распле­тании ДНК в репликативной вилке, и участ­вуют в разделе­нии двух дочерних хромосом. Од­нако топои­зомеразы эукариот имеют некоторые от­личия от прокариотиче­ских: 1

.топоизомеразы I эукариот взаи­модействуют с 3¢-фосфорильным концом разорванной цепи (прока­риотические --с 5¢-фосфорильным кон­цом) 2

. топои­зомеразы I эукариот устраняют как отри­цательные, так и положительные сверх витки (прокариотиче­ские—только отрицательные) 3

.топоизомеразы II эу­кариот не способны инду­циро­вать образование отрица­тельных сверхвит­ков (как это делает в релаксирован­ных кольцевых ДНК гираза бактерий).