Векторы экспрессии

Ещё одна эффективная система экспрессии разработана на основе ксилозного оперона (Bhavsar et al., 2001).

Созданная система экспрессии состоит из следующих элементов (рис.5b):

1) промотор PxylA, под контролем которого идёт экспрессия клонированного гена;

2) 5¢- концевой участок гена xylA(ген изомеразы ксилозы), содержащий оптимизированный CRE (catabolite-responsive element) - цис-действующий элемент, репрессирующий транскрипцию xyl оперона;

3) оператор xylO, с которым в отсутствие индуктора (ксилозы) связывается репрессор XylR;

4) ген xylR, кодирующий репрессор XylR, со своим промотором PxylR.

Система была вставлена в вектор pDG364 (Cutting, Horn, 1990), способный интегрировать с хромосомой B. subtilis в сайте amyE путём двойного кроссинговера. Таким образом, полученный вектор, обозначенный как pSWEET, позволяет осуществлять встраивание ксилозной системы экспрессии в хромосому B. subtilis. Для определения эффективности функционирования данной системы экспрессии к её проксимальному концу был пришит репортёрный ген bgaB – ген термостабильной b-галактозидазы из B. stearothermophilus (полученная плазмида обозначена как pSWEET-bgaB) (рис.5b). bgaB можно вырезать вместе с RBS с помощью PacI и одной из рестриктаз для полилинкера, и заменить его любым интересующим геном.