Векторы с регулируемой копийностью

Часто необходимо, чтобы синтез продукта гена шёл на определённом уровне. Для достижения этого можно использовать регулируемые промоторы различной силы. Изменение дозы гена предоставляет дополнительный уровень контроля экспрессии гена. Чтобы показать, что для этой цели можно использовать производные pILnew, в pJIM2279 была осуществлена вставка lux генов и была измерена люциферазная активность при низком и при высоком числе копий вектора. При этом сначала измерялась активность экспрессии с промоторов расположенных в pJIM2279 проксимальнее MCS (промотор кластера orfD-repE и промотор гена резольвазы), а затем с промоторов клонированных в pJIM2366 и pJIM2367(см. выше). Данные показали, что наблюдается чёткая корреляция между дозой гена (количество копий вектора на клетку) и уровнем люциферазной активности. Был сконструирован клонирующий вектор pJIM2375, содержащий промотор mleS для конститутивной экспрессии на среднем уровне в L.lactis, RBS и сайт для клонирования NdeI.

На основе pILnew были созданы производные векторов pJIM2278 и pJIM2279, в которых репликон pILnew может быть отделён от маркера резистентности путём разреза одной рестриктазой в уникальном сайте рестрикции. На основе этого репликона можно затем создавать новые векторы несущие различные маркеры или гены-репортёры.

pJIM2244 и pJIM2245 являются производными pJIM2279, содержащими гены устойчивости к эритромицину и хлорамфениколу соответственно. В этих конструкциях из всего полилинкера pJIM2279 оставлен единственный сайт EcoRI (в pJIM2245 также часть MCS плазмиды pBluescript). pJIM2241 и pJIM 2246 являются EmR и CmR производными pJIM2278 соответственно и содержат большую часть полилинкера pJIM2278 на конце BssHII фрагмента содержащего репликон. Первые две плазмиды созданы для восстановления репликона pILnew без дополнительных сайтов рестрикции. Другие две плазмиды позволяют менять маркер, в то время как гены, клонированные в полилинкере, остаются связанными с репликоном.